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グウェン・ステイシー(スパイダー・グウェン)
マイルスとは別のマルチバースに生きているスパイダー・グウェン。お互い悩みを打ち明けあうなど、マイルスのよき理解者。クールで⾃信に満ち溢れ、⾼校のバンドではドラマーを担当。
前作『スパイダーマン︓スパイダーバース』ではともに戦った。マイルスが密かに恋⼼を寄せているところ、グウェンが突如やってくる。スパイダーマンの運命を知るグウェンは「別次元のグウェンはいつも、スパイダーマンに恋をする。でも決して、結ばれることはない」と語る。
ピーター・B・パーカー(スパイダーマン)
マイルスの師匠的な存在。MJことメリー・ジェーン・パーカーとの間にスパイダーセンス、スキル、反射神経、可愛さ全てにおいてすでに卓越したスーパーパワーを⾒せる将来有望な娘・メイデイを持つ。
ミゲル・オハラ(スパイダーマン2099)
マルチバースの秩序を守るため、各ユニバースから最強のスパイダーマンたちを結集させたスパイダー・ソサエティの創設者。真⾯⽬で厳格な性格の持ち主。悪党たちを捕まえてそれぞれのユニバースに連れ戻すことを使命としている。
ジェシカ・ドリュー(スパイダーウーマン)
颯爽とバイクを乗りこなす、超クールな女性。妊娠中で、⽣まれてくる⼦供のためにも世界の平和を守ることに全⼒を尽くしている。グウェンを含む次世代のスパイダーピープルたちの優れた指導者。
パヴィトル・プラパカール(スパイダーマン・インディア)
マンハッタンとムンバイを掛け合わせたムンバッタン出⾝の楽観主義者。蜘蛛に噛まれて⼒を得た他のスパイダーピープルと違い、神秘的なシャーマンによって⼒を獲得した。
ホービー・ブラウン(スパイダー・パンク)
70年〜80年代のロンドンと現代のニューヨークを混ぜ合わせたような⼀⾵変わったユニバースからやって来たスパイダーマン。ロックギターを操り、⾳波を武器として使いこなすクールで⾃由な男。
ベン・ライリー(スカーレット・スパイダー)
声優は、マイルス役のシャメイク・ムーア、グウェン役のヘイリー・スタインフェルドなどが続投するほか、スパイダーマン2099／ミゲル役のオスカー・アイザックが本格的に参戦する。
また、⽇本語吹替版の声優として、マイルス・モラレス／スパイダーマン役は⼩野賢章、グウェン・ステイシー／スパイダー・グウェン役は悠⽊碧、ピーター・B・パーカー／スパイダーマン役は宮野真守が、そしてミゲル・オハラ／スパイダーマン2099役は関智⼀が、それぞれ続投する。
